蛋白分析FAQ彙總
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肽不僅包含正確的肽,還包含雜質(例如水和生產中的有機鹽)。肽純度是指相對於除水分以外的所有雜質的正確肽的數量。然而,肽含量是靶向肽相對於樣品中其他所有物質的百分比,通常由N元素分析和氨基酸分析確定。因此,即使肽純度達到99%,考慮到水和有機鹽的肽含量仍可能為70%-80%。相關服務:肽純度分
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肽分離純化最常用的技術是反相高效液相色譜 (RP-HPLC)。相關服務:肽純度分析
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• 反相高效液相色譜(RP-HPLC)中通常使用哪種流動相進行肽分離和純化?
最常見的流動相是水和乙腈,三氟乙酸(TFA)充當離子對試劑。根據不同的肽段,採用合適的梯度洗脫進行肽段分離。相關服務:肽純度分析
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• 為什麼在流動相中新增三氟乙酸(TFA)作為離子對試劑?是否有任何其他流動相或離子對試劑可用於肽分離和純化?
三氟乙酸(TFA)可用於調節流動相的pH值,作為離子對試劑與多肽相互作用,增強分離效果並顯著改善峰形。 其他用於多肽分離純化的流動相或離子對試劑,包括乙酸體系、磷酸體系、鹽酸體系、七氟丁酸等,均可透過調節pH並達到很好的分離效果。相關服務:肽純度分析
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大多數肽可以溶解在超純水中,對於一些不溶性肽,需要先分析其氨基酸序列。酸性肽可先溶於少量鹼性溶液(如0.1%氨水),然後稀釋至所需濃度。鹼性肽則可溶於少量酸性溶液(如乙酸、三氟乙酸),然後稀釋至所需濃度。對於疏水性肽,可溶於強極性有機溶劑(如二甲基甲醯胺(DMF)、甲醇、丙醇、異丙醇、二甲基
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• 在反相高效液相色譜(RP-HPLC)中通常使用什麼作為色譜填料?
最常見的填料是 C18、C8 和 C4 反相色譜柱。相關服務:肽純度分析
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在資料集中,iRT肽/蛋白質是消化後新增的標準肽混合物。當您選擇iRT標準時,Skyline會在其用戶界面中提供完整列表。相關服務:DIA定量蛋白質組學
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• 在鑑定的iRT蛋白中,一些肽呈紅色,少數呈綠色。紅色肽段是否表明鑑定可信度低?
如果您忘記切換到“Integrate All”,這可能會使它們全部變綠。在這種情況下,它表明離子對共流出的效果,並不能表徵鑑定的質量。該功能最初旨在幫助選定反應監測(SRM)的離子對細化,以幫助鑑別沒有為峰組貢獻“well-formed”訊號的離子對。可能是由於干擾或只是下降到量化的下限以下
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是的,組比較p值來自配對的T檢驗。不過,它也是使用多重比較Benjamini-Hochberg演算法調整p值。如果您想使用更復雜的統計方法,我們建議您考慮MSstats或Skyline類似工具(依賴於從Skyline匯出的報告)。相關服務:DIA定量蛋白質組學
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若因為某些因素在您的樣品之間表現出10倍的均值變化,這並不意味著使用低方差一致測量可靠地測量了變化。如果方差或測量次數足夠高,則調整後的p值可能仍不會低於0.05。如果不是,您需要考慮是否值得將其帶入下一輪考慮。在每一輪驗證中你繼續考慮的越多,你的研究工作負擔就越重,你的統計數據就越容易受到
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