蛋白分析FAQ彙總

• • 如何知道從頭測序服務的序列是否正確？

  這些序列基於質譜資料。根據我們的經驗，我們向客戶報告的序列正確率超過 99%。相關服務:從頭測序

• • 純化中如何選擇色譜填料？

  具有不同序列的肽在理化特性和疏水性方面表現出很大差異。 在大多數情況下，C18 色譜柱對分子量小於 4000 或親水性的肽段表現出最佳分離效果。 C4 柱適用於分子量超過 5000 或含有疏水末端的肽段。 C8柱介於C18柱和C4柱之間，其效果與C18柱類似。 對於一些特殊的選擇性肽段，也可

• • 純化中選擇聚合物填料的原理是什麼？

  當要求更高的 pH 或溫度時，選擇pH範圍更寬的聚合物 HPLC 柱可能適用於純化。 它們在極端pH條件下不會降解，因此可以使用強酸和強鹼作為流動相進行分離和純化。相關服務:肽純度分析

• • 影響多肽純化的因素是什麼？

  影響多肽純化的因素很多，主要包括流動相、色譜柱型別、柱溫、波長、色譜儀效能等。 這些差異可能會導致最終結果出現錯誤。相關服務:肽純度分析

• • 頻繁的基線漂移可能是什麼原因？ 如何解決？

  反相分離中基線漂移的主要原因是固定三氟乙酸（TFA）濃度的梯度洗脫會導致 210-220 nm 處的吸收基線發生偏移。 建議使檢測波長儘可能接近215 nm，以減少或消除由TFA吸收光譜變化所引起的基線漂移。此外，與溶劑B相比，透過在溶劑A中新增15% TFA來補償基線漂移。例如，如果溶劑

• • 反相色譜純化後，如何從最終產品中去除流動相中的三氟乙酸（TFA）、乙腈等雜質？

  只要不超出耐受範圍，凍幹可能是去除大部分三氟乙酸（TFA）和乙腈的最簡單和最有效的方法。 但該方法不能滿足一些對TFA含量要求較高的多肽類藥物的要求， 應與它們進行特殊的鹽轉化和脫鹽處理。相關服務:肽純度分析

• • 肽的一般鹽形式有哪些？ 如何轉換鹽形式或脫鹽？

  大多數肽在三氟乙酸（TFA）體系下純化，因此TFA鹽是最常見的形式，其次是乙酸鹽和鹽酸鹽形式，很少有肽藥物是特殊鹽形式。 離子交換和高效液相色譜（HPLC）是最常用的鹽轉化方法，而 G25（GE Healthcare 的葡聚糖凝膠）柱可用於脫鹽。相關服務:肽純度分析

• • 選擇色譜裝置時要考慮什麼？

  規模/流量、自動化、耐壓、感測器、易於使用的軟體、服務等。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 快速蛋白液相色譜（ Fast Protein Liquid Chromatography，FPLC）如何工作？

  在快速蛋白質液相色譜 (FPLC) 中，Unique Autopure 之類的蛋白純化儀採集我們的蛋白質樣品並將其泵入由特定緩衝液平衡的色譜柱上。 然後用不同的緩衝液或緩衝液梯度清洗色譜柱，不同的成分會以不同的停留時間從柱子中洗出。 Unique Autopure 具有預定義的步驟，使用者可

• • 色譜法（Chromatography）的基本原理是什麼？

  色譜法（Chromatography）是一種基於混合物中各組分的親水性、親和性、電荷和分子大小差異的分離技術。 不同的色譜技術是根據不同原理或不同原理的組合開發的。常規色譜方法——疏水相互作用色譜（HIC）、離子交換色譜（IEX）、薄層色譜（AC）、分子排阻色譜（SEC）等。相關服務:蛋白質