蛋白分析FAQ彙總

• • 凝膠內的蛋白樣品是否可以長期儲存？

  如果儲存時間超過一週，可以將蛋白條帶切取後放入-20℃或者-80℃冰箱儲存；如果小於一週，則可以常溫儲存。相關服務:凝膠及影象分析

• • 凝膠內的蛋白樣品如何運輸？

  一般將樣品常溫快遞運送即可。相關服務:凝膠及影象分析

• • 凝膠內的蛋白樣品對質譜鑑定有何影響？

  基本不會影響後續質譜鑑定效果。相關服務:凝膠及影象分析

• • iTRAQ/TMT技術相對於電泳技術有什麼優勢？

  相較於2-DE以及DIGE等基於電泳的技術，iTRAQ/TMT解析度高，可提供成百上千的蛋白定性定量資訊；其次通量高，可一次性對多個樣品進行試驗，特別適合於多組樣品間的同時比較以及生物學過程的動態檢測。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT， SILAC

• • iTRAQ/TMT實驗的主要步驟有哪些？

  主要步驟包括蛋白提取、濃度及純度測定、蛋白酶解、同位素標記、高效液相色譜分離、高分辨LCMSMS質譜檢測、搜庫定性定量分析、差異蛋白篩選、差異蛋白生信分析以及中英文結題報告整理。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT， SILAC

• • iTRAQ/TMT實驗主要採用哪些儀器？

  目前常用於iTRAQ/TMT實驗的質譜儀主要有AB 5600 Triple TOF和Thermo Q Exactive Orbitrap等。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT， SILAC

• • iTRAQ/TMT實驗資料可做那些生物資訊分析？

  資料分析包括：差異蛋白質統計分析（火山圖、韋恩圖、熱圖、聚類等）、GO/COG功能註釋及富集分析、KEGG通路註釋及富集分析、差異表達蛋白聚類分析以及PPI網路分析等相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT， SILAC

• • iTRAQ/TMT實驗的中“組分”或者“SCX分級”代表什麼？

  iTRAQ/TMT實驗對肽段進行的是二維LC-MS分析，其中第一維的色譜分析主要採用的是SCX或者高pH值的HPLC將標記好的肽段混合樣品初步分離成10個組分，以此來達到降低每個組分中肽段樣品的複雜程度，“組分”或“SEC分級”指的就是這種一維分級。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTR

• • 可以採用什麼軟體分析iTRAQ的下機原始資料？

  一般採用與AB 5600 Triple TOF質譜配套的proteinpilot 5.0v軟體進行後續的質譜資料分析，proteinpilot 5.0v在蛋白質組定性定量鑑定中被廣泛認可，已有大量學者利用該軟體分析資料並發表了相關文獻。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT，

• • 如何根據iTRAQ的下機原始資料如何篩選差異蛋白？

  目前還沒有統一的標準來篩選差異蛋白，爲了有利於後續的生信分析，實際篩選中一般將每組的差異蛋白總數控制在200左右，或者在所鑑定的蛋白總數的10%左右。相關服務:基於標籤的蛋白質定量技術-iTRAQ，TMT， SILAC