在流動相中新增新增劑以透過SEC分析蛋白質有哪些優缺點？

有時在SEC流動相中使用新增劑可以促進蛋白質的溶解，防止蛋白質與固定相發生二次相互作用或使蛋白質變性。用於SEC蛋白質分析的常用新增劑包括十二烷基硫酸鈉 (SDS)、尿素和鹽酸胍。這三種新增劑都增強了蛋白質的溶解性，並且它們都透過破壞蛋白質的非共價鍵來促進變性。在樣品和流動相中新增SDS等表面活性劑會破壞球狀蛋白質的天然形狀，形成尺寸小得多的棒狀結構，從而提高色譜分析效率。鹽酸胍和尿素將蛋白質結構破壞為隨機捲曲（較大）的結構。在蛋白質溶解度有限或懷疑樣品和色譜柱基質之間存在非特異性相互作用以及新增另一種緩衝液或水溶性有機溶劑無效的情況下，應考慮在蛋白質SEC分析中使用新增劑。當色譜柱使用大多數新增劑時，SEC色譜柱的效能會發生不可逆轉的變化。例如，與沒有新增劑的色譜柱執行相比，樣品的保留時間可能會發生變化，兩個峰之間的計算解析度可能會發生變化。此外，幾乎不可能從色譜柱中完全去除新增劑。因此，必須指定色譜柱在其整個使用壽命期間僅在流動相中使用新增劑。




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