蛋白分析FAQ彙總
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如果靶蛋白和管家蛋白具有非常不同的分子量並且分離良好並給出非常清晰的條帶,則是可能的。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 如果每個印跡都有標準曲線,是否有助於提高化學發光測定的定量準確性?
是的,如果對蛋白質做一個標準曲線,那麼可以做一個更直接的定量。需要注意的是必須在與樣品相同的膜上繪製標準曲線,因為訊號強度值在印跡之間會根據化學發光特性而變化。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 一般蛋白印跡都是採用SDS-PAGE,但如果在轉膜前進行2D-GE分離應該怎麼做?
可以使用迷你尺寸的凝膠如7cm的IPG條狀凝膠進行1D分離,再使用2孔迷你凝膠進行2D分離。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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剝離膜確實會丟失蛋白質,但是這種丟失不是針對某一種蛋白,而是膜上的全部蛋白,並且由於定量是相對定量,因此可能不會產生太大的影響。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 哪種型別的SDS-PAGE凝膠適合分析具有各種尺寸的糖基化蛋白質樣品,以準備在定量前進行提取?
糖基化蛋白質很難很好地分離。糖基化導致尺寸異質性,繼而導致難以避免的垂直寬頻和垂直條紋。建議使用寬範圍的梯度凝膠,例如4-20%,如果樣品蛋白質的分子量相差比較大,可以試試8-16%。相關服務:基於SDS-PAGE的蛋白分離
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• 如何利用WB分離和轉移大於200kDa-265kDa的蛋白質?
使用低濃度度SDS-PAGE凝膠,最好是4-8%的梯度凝膠。凝膠電泳的時間比通常對較小蛋白質執行的時間更長。在轉膜緩衝液中加入0.1%SDS,以改善大蛋白從凝膠到膜的遷移。也可以將甲醇濃度降低到10%。與轉移較小蛋白質相比,增加轉膜時間。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 對於小蛋白質(<30 kDa)的半乾轉膜,哪種緩衝液效果最好?
小蛋白轉印的一般建議是20%甲醇,並且在轉印緩衝液中不新增SDS。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 小分子量蛋白質轉至0.2微米PVDF,摻入20%MeOH是否會改善其轉印過程?
20%MeO否會改善轉印過程。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 如果要轉移小蛋白質,我應該在轉膜緩衝液中平衡凝膠多長時間?
建議將凝膠在轉膜緩衝液中平衡至少10-15分鐘。與用於較大蛋白質的轉移相比也可以在更短的時間內進行轉膜。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務
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• 我對蛋白質的定量和/或表達水平感興趣。你們能定量在溶液中的蛋白質或多肽嗎?
我們可以分析透過 SILAC、ICAT、ITRAQ 或其他同位素標記策略製備的蛋白質樣品。我們還擁有出色的定量數據處理軟體(ProteoIQ;NuSep)。此外,我們可以使用重同位素標記的合成肽標準品對您樣品中的多肽和蛋白質進行定量。我們很高興討論您的蛋白質組學定量專案。相關服務:定量蛋白組
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