TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白組學分析

iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術是分別由美國AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研發的多肽體外標記定量技術。這兩種技術採用多個（2-10）穩定同位素標籤，特異性標記多肽的氨基基團進行串聯質譜分析，能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量，可用於研究不同病理條件下或者不同發育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。

對於可以傳代的細胞樣品來說，我們可以採取SILAC的方法完成對於細胞蛋白質組的標記過程，但是許多其他研究體系，比如組織樣品以及不能進行傳代培養的細胞來說，需要其他的標記方法來完成定量蛋白組學分析。TMT, iTRAQ等基於體外（in vitro）標記的定量方法應運而生。

iTRAQ標籤包括三部分，如下圖：
1. 報告基團（reporter group）：指示蛋白樣品丰度水平。
2. 平衡基團（balance group）：平衡報告基團的質量差，使等重標籤重量一致，保證標記的同一肽段m/z相同。
3. 肽反應基團（amine-specific reactive group)：能與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連線，從而標記上肽段。




iTRAQ和TMT標籤結構圖

來自不同樣品的同一肽段經TMT/iTRAQ試劑標記後具有相同的質量數，並在一級質譜檢測（MS1）中表現為同一個質譜峰。當此質譜峰被選定進行碎裂後，在二級質譜檢測（MS2）中，不同的報告基團被釋放，它們各自的質譜峰的訊號強弱，代表著來源於不同樣品的該肽段及其所對應的蛋白的表達量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白組學研究因其測定精準度高適應樣品種類多，目前已有很廣泛的應用。百泰派克在傳統的TMT/iTRAQ分析技術的基礎上，提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技術，使用三級碎片報告離子進行定量，可進一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白組學分析的精度，進一步提高定量準確性。

百泰派克公司採用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺，Orbitrap Fusio Lumos質譜平臺結合Nano-LC，推出基於TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白組分析服務技術包裹，您只需要將您的實驗目的告訴我們並將您的蛋白寄給我們，我們會負責專案後續所有事宜，包括蛋白酶切、肽段標價、肽段分離、質譜分析、質譜原始資料分析、生物資訊學分析。
iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析實驗流程



iTRAQ 8-plex定量蛋白組學分析流程


iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析技術特點
• 高通量定量蛋白分析：可以同時分析10個樣品；適合大量臨床樣本，多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物
• 體外標記，適用於分析組織、細胞、血液等多種樣品
• 質譜分析靈敏度高，可檢測較低丰度蛋白，大範圍比較蛋白相對丰度
• 可與富集磷酸化等修飾肽段的方法聯用，更準確研究翻譯後修飾變化
iTRAQ/TMT定量蛋白組學分析樣品要求



TMT-iTRAQ-MultiNotch定量蛋白組學分析樣品要求

注意：樣品運輸請使用足量的乾冰運輸，並且儘量選用較快的郵遞方式，以降低運輸過程中樣品降解的可能性。
中/英文專案報告
在技術報告中，百泰派克生物科技會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜引數（中英文）
3. 質譜圖片
4. 原始資料
5. 蛋白差異水平分析
6. 生物資訊學分析
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