Pull-down靶蛋白質譜鑑定

在生物體的生命活動中，蛋白質的功能是透過蛋白質與蛋白質之間的相互作用來實現的。因此，研究新的蛋白互作可以為研究蛋白質的潛在功能提供新的方向。在諸多蛋白互作鑑定實驗中，Pull-down常用於體外蛋白互作檢驗，以及幫助發現新的互作蛋白。Pull-down實驗利用高度純化且富集的誘餌蛋白捕獲在細胞中相互作用較弱或丰度低的靶蛋白，大幅度提高發現新靶蛋白的效率。Pull-down實驗的具體步驟為：表達純化GST、polyHis或Biotin標記的誘餌蛋白，使用固定化親和配體將誘餌蛋白與固相基質穩定結合，再將誘餌蛋白與待測細胞裂解液進行混合孵育，在這一過程中，誘餌蛋白與目標蛋白相互作用並結合在一起，透過清洗除去非特異性結合的雜蛋白，即可獲得與誘餌蛋白相互作用的目標蛋白，再透過質譜分析對目標蛋白進行鑑定。

百泰派克公司利用進口的GST pull-down試劑盒，能夠快速準確的完成蛋白互作實驗，結合公司先進的UPLC-MS質譜平臺，推出基於pull down的蛋白分析一站式技術服務，靈敏度高、解析度準確。我們既可以為您pull down實驗後的蛋白樣品進行檢測，也可以您寄來樣品，我們從pull down實驗到樣品質譜分析一站式解決。您只需要將您的需求和樣品寄給我們，我們會負責專案後續所有事宜，包括樣品前處理、pull down、質譜分析、質譜原始資料分析。

Pull-down蛋白質鑑定流程

Pull-down蛋白質鑑定流程

關於樣品

1D SDS PAGE /2D PAGE gels樣品：
1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby以及Silver stain樣品均可進行蛋白的鑑定試驗；
2. 銀染的樣品有可能與後續的質譜分析不相容，我們推薦您使用下面的產品或者實驗步驟進行銀染實驗：
ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)
Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)
3. 銀染的樣品請不要進行脫色處理

液體樣品（In solution format）：
1. 如果您洗脫的樣品需要跑膠，請按照1D SDS PAGE樣品準備要求準備樣品即可；
2. 假如樣品中蛋白量＞10ug，我們對樣品的緩衝體系沒有要求；
3. 假如樣品中蛋白量＜10ug，樣品準備過程中儘量減少SDS等表面活性劑的使用，並注意降低鹽濃度；
4. 提交樣品過程中，請同時提供樣品的緩衝體系和樣品中蛋白的預估含量；
樣品運輸：
我們推薦您將樣品凍幹後進行運輸，凍幹樣品中蛋白非常穩定；
液體樣品推薦乾冰運輸，短途運輸冰袋也可以；
注意：
利用質譜進行蛋白樣品的鑑定，在樣品準備過程中需佩戴手套和頭套，儘量避免自身角蛋白（keratin）對樣品的汙染。

中/英文專案報告

在技術報告中，百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜引數（中英文）
3. 質譜圖片
4. 原始資料
5. 鑑定的蛋白質詳細資訊