Far-Western Blot分析
Far-Western Blot是一種基於Western Blot技術的分子生物學方法，可用於檢測體外蛋白質與蛋白質的相互作用，尤其是不需要目標蛋白質的天然結構的相互作用檢測。
Far-Western Blot技術的整體工作流程與Western Blot相似，只是Western Blot中探測目標蛋白質需要抗體，而Far-Western Blot分析中不需要抗體，而是使用經過純化和標記的“誘餌”蛋白來探測和檢測膜上的目標蛋白。在Western Blot和Far-Western Blot中，蛋白質都是透過SDS凝膠和native PAGE凝膠對樣品進行分離，然後將蛋白質從凝膠轉移到膜上。轉模後，用BSA進行封閉。在膜上對蛋白質進行變性和復性，及後續的檢測步驟。Far-Western Blot技術用商業化的高度純化的誘餌蛋白將膜標記上探針。在誘餌蛋白與目標蛋白反應後，根據所使用的誘餌蛋白，可以檢測到與該目標蛋白相對應的條帶。
爲了鑑定與給定蛋白相互作用的蛋白，Far-Western Blot是一個實驗成本低、靈敏度高的有效平臺。遠western blotting的原理是對western blotting的改進，以自然摺疊的重組蛋白作為第一個探針，與轉染到PVDF膜上的蛋白相互作用。Far-Western Blot使用的第二個探針是針對給定蛋白的特異性抗體，而酶標的第三個探針是針對第二個探針的抗體。當與LC-MS-MS蛋白鑑定相結合時，可以對得到的蛋白斑點(或蛋白條帶)進行表徵，然後進行進一步的功能分析，如蛋白免疫沉澱等。
Far-Western Blot分析時，當需要保留蛋白質的天然構象和天然相互作用時需要注意以下問題：1）變性條件下在SDS凝膠中分離的蛋白質可能會發生變性，而變性蛋白可能不會與誘餌蛋白髮生反應，從而導致無法識別出相互作用。2）在結合之前將蛋白質變性並復性，也可能導致蛋白質發生構象變化，從而影響靶蛋白與誘餌蛋白的結合。3）如果結合位點受其它因素影響，失去與誘餌蛋白的結合能力，使誘餌蛋白無法與之反應，也可能導致相互作用檢測失敗。更棘手的是，以非天然構象呈現的蛋白質可能以新的非天然方式發生相互作用，導致檢測假陽性。
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Far-Western Blot分析
Far-Western Blot分析的優勢
• 可用於體外蛋白質相互作用研究
• 分析蛋白的結合域
• 比較蛋白質結合的親和力
• 無需特異性抗體
Far-Western Blot分析的工作流程
1. 定量蛋白質，並透過SDS或native PAGE分離
2. 將蛋白質從凝膠轉移到膜上
3. 將蛋白質進行變性和復性，以保證膜上的蛋白質結合位點充分暴露
4. BSA緩衝液對膜進行封閉
5. 將膜與純化的誘餌蛋白進行孵育
6. 檢測誘餌蛋白訊號
7. 影象分析及報告交付
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