蛋白分析FAQ彙總

• • 質譜分析蛋白質的數量極限是多少？

  典型的質譜儀檢測極限約為480fg，相當於約10amol或600萬個50kDa的蛋白質分子（5KDa是人類蛋白質組的中位數分子量),當然不同質譜儀的檢測上限是隨靈敏度動態變化的。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 如何讀取質譜資料？

  1、鑑定分子離子：分子離子通常在質譜上表示為具有最高m/z比的峰；2、確定主要碎片叢集；3、確定每個主峰的∆m；4、識別雜原子；5、識別分子的其他部分；6、對分子進行命名；7、對上述分析過程進行檢查。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 質譜中的M、Z表示什麼？

  M代表分子質量，Z代表分子離子的電荷數，m/z表示質荷比，質譜圖中的橫軸以m/z為單位表示。由於GC-MS的z幾乎總是1，因此m/z值通常被視為質量。相關服務:蛋白質質譜鑑定

• • 蛋白印跡電泳中條帶出現歪斜是什麼原因？

  可能是由於電轉儀使用時間過長，沒及時更換，導致海綿變薄，“三明治”結構鬆動。可以更換電轉儀或者在兩塊海綿之間墊上草紙。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 為什麼轉膜後膜上出現白點？

  確認一下膜與膠塊之間是否存在氣泡。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 轉膜過程中緩衝液溫度高？

  可能是轉膜過程中電壓過高，或者是緩衝液的離子濃度太低導致的。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 為什麼顯影后膠片背景很高？

  造成顯影背景高的原因很多，比如洗膜不充分、一抗特異性不強、二抗濃度過高以及曝光時間過長等。當背景很高時，可以從以上幾方面進行排查。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • 蛋白印跡實驗中，跑完SDS-PAGE後條帶很淺，有些甚至沒有條帶是什麼原因？

  如果電泳過程沒有問題的話，可以考慮樣品中是否含有目標蛋白，或者是不是上樣量太少。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • WB雜交訊號太弱的原因？

  1、抗體濃度過低或者失效了；2、曝光時間過短；3、轉膜效果不好，膜上的蛋白條帶太淺。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務

• • WB最後為什麼會出現非特異性條帶？

  這種非特異性條帶可能是由於靶蛋白有多種翻譯後修飾位點導致的一種正常現象，也有可能是由於操作不當導致的，比如一抗的特異性不高、一抗和二抗的濃度過高或者蛋白樣品降解等。相關服務:蛋白質免疫印跡和電轉移服務