免疫沉澱有哪些不同的方法？

免疫沉澱可透過直接和間接方法進行。直接法：在這種方法中，珠子首先與抗體結合，然後將抗體-珠子複合物新增到蛋白質混合物中，並在 2-8°C 的溫度下旋轉孵育。孵育時間完全取決於靶蛋白濃度以及抗體對靶蛋白的特異性。接下來，目標蛋白透過抗體被珠子捕獲，或者簡單地進行免疫沉澱。抗體被固定在固相基質上，例如顯微瓊脂糖和超順磁珠。直接法僅適用於目標蛋白含量較高或抗體需求較少的情況。間接方法：首先將抗體新增到細胞裂解物中，因此抗體與靶蛋白結合形成蛋白質複合物。隨後新增塗有蛋白質 A/G 的珠子以靶向複合物中的結合蛋白。除此之外，流程趨同並且最終結果是相同的。然而，過量的抗體會導致與 A/G 珠子結合，因為遊離抗體比結合抗體移動得更快。當靶蛋白濃度低或抗體對靶蛋白親和力差時，間接法非常適用。爲了控制背景結合，樣品和珠子需要孵育更短的時間。

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