如何在凝膠上樣前濃縮蛋白質樣品？

傳統的蛋白質濃縮方法，如膜透析、TCA 沉澱和膜過濾，由於樣品損失百分比大，通常不適用於微量純化過程。乾燥蛋白質樣品會導致高濃度的鹽和任何其他化學物質可能干擾凝膠電泳。根據我們的經驗，我們建議一種簡單而快速的方法，該方法將蛋白質結合到一些裝在微柱中的反相珠子上，洗滌以去除鹽分，並在上樣到凝膠之前用 SDS 上樣緩衝液（煮沸或不煮沸）洗脫. 我們一直在使用 Stradegene 的 GeneClean 和 Applied System 的 R1/R2，每種方法都有良好的樣品回收率。然而，由於每種蛋白質都有其獨特的性質，不同的純化程式可能會產生不同的樣品，強烈鼓勵研究人員確定和最佳化他們的最佳樣品濃縮程式。原則上，濃縮樣品的方式對凝膠分離蛋白的後續質譜蛋白鑑定步驟沒有影響。因此，樣品濃縮方法的有效性可以很容易地透過樣品回收率和凝膠電泳期間此類樣品的行為來判斷，這可以透過執行上有相同量的預濃縮和後濃縮樣品的 SDS PAGE 來監測。




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