如何克服蛋白質不同互動屬性的問題？

許多蛋白質是“社會性”的，並且在稱為蛋白質複合物的組中相互作用。其他一些合作伙伴相當“非社交”，只有有限的交流（例如訊號轉導途徑），並且僅參與短暫的相互作用（即容易形成和破壞的蛋白質相互作用）。 可以使用交聯劑（例如甲醛）的作用將相互作用蛋的白質“粘合”在一起。 例如，您可以在蛋白質提取物中使用0.75%的甲醛和體外交聯蛋白珠。培養時間可以是10分鐘，如果您“過度交聯”目標蛋白質，可能會增加非特異性蛋白質背景。 可能需要考慮的要點： 1.若不保持密封，甲醛會氧化成多聚甲醛。雖然甲醛是一種零長度交聯劑，但多聚甲醛不是。 2.甲醛交聯，與任何其他交聯劑一樣，取決於底物濃度。如果您正在執行體內交聯，請確保每個蛋白結合物質都以正確的水平表達，能控制正確的表達水平是關鍵。 3.交試劑也高度依賴於溫度。因此，使用冷或溫的PBS緩衝液不僅會影響目標複合物的交聯，還會影響背景蛋白非特異性交聯。 4.若控制表明每個交聯物質都按預期表達，則要求實驗過程中的甲醛濃度可能需要一些最佳化。 5.低濃度甲醛與質譜儀器相容。 請使用無甲醇FA（free ammonia），因為商店提供的穩定溶液可用於消毒，但不適用於生化或細胞生物學研究。




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