提交蛋白質樣品進行質譜鑑定需要做什麼？

對於單個蛋白凝膠條帶： 採用小型凝膠進行電泳並進行考馬斯亮藍染色。也可以使用SYPRO™ Ruby進行染色，但銀染條帶可能不能涵蓋足夠的蛋白質用於鑑定。透過與已知濃度的標記物進行比較來預估條帶中的蛋白含量。染色時間不得超過15分鐘。如果將凝膠染色太久，染料碎片會影響後續脫鹽步驟。用乾淨的手術刀切下蛋白條帶，並切除多餘的凝膠。過量凝膠將對分析不利。如果您將多個泳道的凝膠條帶作為一個樣品提交，請剪下並丟棄條帶之間的空白部分凝膠！ 對於複雜樣品（如裂解物）： 不要將凝膠跑完，如果存在堆疊凝膠，僅將樣品在凝膠中電泳不超過0.75 cm。 對於沒有明顯堆疊凝膠的預製凝膠，只需將樣品從孔中跑出不超過0.75 cm即可。條帶的寬度不應超過單個微型凝膠孔道（~2mm）。停止電泳前加入kaleidoscope標記有助於驗證高分子量蛋白質是否已經進入凝膠。對上述凝膠進行染色。凝膠塊中不能含有染料，因為這樣會導致樣品不能在液相色譜上正常執行。僅取考馬斯染色的蛋白質凝膠塊區域，還需提供凝膠上蛋白質含量的大概預估值。理想情況下，凝膠塊的寬度約為2mm。此外，如果蛋白凝膠條帶中含有過多的凝膠，將會影響所能鑑定到的蛋白數目，提交樣品前應切除所有多餘的空白凝膠，並將每個凝膠條帶或凝膠塊單獨收集在容量為500ul的EP管中。




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