如何準備和提交用於蛋白質分子量測定的樣品？

樣品推薦： 建議樣品體積中至少含有300pmol的蛋白質，在30μM的濃度下，體積約10μL，當然樣品中所含蛋白質越多越好。樣本應該是純的，否則解摺積可能不起作用。 去汙劑與質譜不相容，必須在分析前從緩衝液中除去。去除緩衝液中的所有聚合物或去汙劑（例如TritonX、NP-40、SDS或類似聚合物），它們的強離子訊號會掩蓋蛋白質MS訊號，也會堵塞蛋白質進樣口並汙染檢測線路。 去除低粘度緩衝成分（例如甘油或PEG），因為它們會堵塞系統中的檢測管道。 10mM的乙酸銨溶液是理想緩衝液。也可以使用Tris或磷酸鹽等作為緩衝液，但不推薦使用，因為這些緩衝液中的鹽會降低質譜檢測中的訊號，導致解摺積和質量測定效果不佳。 樣品純化： 使用水/乙腈緩衝液進行FPLC/HPLC純化、丙酮或TCA沉澱進行充分洗滌是樣品純化的兩種常用方法。透過離心和透析進行MW（分子量）過濾對某些分子起作用，但一些去汙劑會形成膠束使其成為大分子質量物質，因此它們不能透過MW過濾或透析去除。可以使用樹脂去除洗滌劑。如果要更換緩衝液，我們建議將其更換為0.1%甲酸和水。如果您需要中性pH值，則可以使用乙酸銨緩衝液。




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