是否可以在將樣品上樣到SDS凝膠上之前用TCA沉澱樣品以增加蛋白質濃度?
在上樣到1D凝膠之前,存在不同的方法來增加蛋白質濃度,包括透析、微濾、沉澱和色譜。您可以使用TCA沉澱,但TCA是一種強大的酸,可能導致某些蛋白質的水解和碎裂。通常經常使用冰凍的乙醇/丙酮進行沉澱,它在增加蛋白質濃度的同時可去除大多數鹽和緩衝液成分。具體做法是將樣品與冷凍的乙醇以100 ul:400 ul的比例混合並在-20°C下孵育。隨後加入400 ul冷凍的丙酮並在-20°C下孵育。 最後將樣品離心並用丙酮/乙醇/水(2:2:1)洗滌。
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