HPLC—導致保留時間可重複性較差的原因及解決辦法是什麼？

1.流動相組成：大多數可重複的結果都是透過稱量流動相混合物獲得的。對於水/乙醇，將30/70（v/v）300克（300毫升x1克/毫升）水與546克（700毫升x0.78克/毫升）乙醇混合。特別是當使用醇類作為極性改良劑時，應避免在HPLC泵中進行混合，因為組分的粘度變化很大，不利於混合。流動相應始終新鮮製備，因為蒸發會改變雙組分流動相的組成。2.溫度變化:5°C的差異會使保留時間發生+/- 10%的偏移。因此，即使在環境溫度下工作時，也建議使用柱式烤箱。3.酸鹼度控制:酸性和鹼性分析物的保留時間取決於pH值。0.1pH單位可使保留時間偏移10%。因此，建議在pKA至少2個pH單位的pH值下工作。4.不完全平衡:建議在開始分析之前，用至少10柱體積平衡反相色譜柱，至少20個柱體積平衡緩衝流動相。確保用足夠的流動相吹掃所有流動相通道。正相色譜柱可能需要比反相色譜柱長10倍的平衡時間。5.除溼:高極性流動相可從疏水性多孔系統中排出，導致可接觸的表面積越來越小，從而導致保留時間越來越短。




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