蛋白質譜iTRAQ分析
蛋白質譜iTRAQ分析指的是同時利用iTRAQ標記技術和質譜技術對蛋白質進行分析的一種技術,主要用於定量蛋白質組學分析中。百泰派克生物科技提供基於質譜的蛋白iTRAQ分析服務。
蛋白質譜iTRAQ分析
蛋白質譜iTRAQ分析指的是將iTRAQ標記技術和質譜技術結合對蛋白質進行分析的一種分析技術。iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation)是由AB SCIEX公司開發的一種多肽體外標記技術。在定量蛋白質組學中,iTRAQ採用多種同位素標籤(4種或8種),可以標記單個實驗中有不同來源的蛋白質酶消化後的肽段N端,然後將這些肽段進行串聯質譜分析,可同時比較多種不同來源中蛋白質的相對和絕對含量。
蛋白質譜iTRAQ分析原理
iTRAQ標籤主要由三部分構成:報告基團,平衡基團和肽反應基團。其中,報告基團和平衡基團一起組成等重標籤。不同標籤的報告基團的重量不同,用於指示蛋白樣品的丰度水平。平衡基團則用於平衡報告基團的質量差,使等重標籤重量一致,保證標記的同一肽段的m/z相同。肽反應基團則用於與肽段N端及賴氨酸側鏈氨基發生共價連線,從而標記上肽段。
在蛋白質譜iTRAQ分析中,蛋白質首先被裂解為肽段,然後用iTRAQ試劑進行差異標記。由於iTRAQ試劑是等量的,標記的同一多肽在第一級質譜檢測中分子量是完全相同的,因此需透過第二級質譜進行分析。在二級質譜分析過程中,報告基團、平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂,平衡基團丟失,不同報告基團離子強度的差異就代表了它所標記的多肽的相對丰度。同時,多肽內的醯胺鍵斷裂,得到碎片離子的質量,透過資料庫查詢和比較,可以鑑定出相應的蛋白質。
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