做SUMO內源性的Coip,樣品組織放太久了對實驗有影響嗎?提取蛋白時加了NEM了
- 進行蛋白質濃度測定
- 透過SDS-PAGE分析蛋白質的完整性,觀察是否有降解產物。
如果樣品組織存放時間過長,尤其是在非最佳條件下(如未適當冷凍或未新增蛋白酶抑制劑),蛋白質可能會發生降解或發生不可逆的改變,導致實驗的蛋白質量量和修飾狀態不準確。即使在加入了NEM的情況下,這些改變仍可能發生,因為NEM主要是用來抑制蛋白酶的活性,而不是防止所有的蛋白質降解形式。因此,儘管加入NEM有助於保護蛋白質不被泛素化酶和SUMO化酶降解,但它不能完全防止蛋白質在存放過程中可能發生的其他非酶促降解過程。
在實驗前,建議您評估一下提取的蛋白質的質量:
如果蛋白濃度合適,SDS-PAGE顯示的蛋白條帶清晰,沒有明顯的降解標誌,那麼您提取的蛋白質樣本應該是適合進一步實驗的。但是,若有可疑的降解或其他異常,最好準備新鮮的樣品以獲取最可靠的實驗結果。
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