脂質代謝組學研究中,組織提取脂質的辦法?

    在脂質代謝組學研究中,組織提取脂質的常用方法如下:


    1.樣品製備

    • 收集組織樣本:確保樣本新鮮,並迅速將其冷凍以防脂質氧化。
    • 稱重:精確記錄樣本的重量,以便後續計算脂質濃度。

    2.均質化

    使用均質器(如珠磨機、超聲破碎機等)在冷卻條件下將組織樣本均質化,以釋放細胞內的脂質。


    3.脂質提取

    Bligh和Dyer方法適用於小樣本量。

    • 向樣品中加入甲醇和氯仿的混合溶劑(比例通常為2:1)。
    • 徹底混合後,加入氯仿和水,使最終比例達到1:1:0.9(甲醇:氯仿:水)。
    • 離心,收集下層含有脂質的氯仿相。

    Folch方法:適用於較大樣本量:

    • 使用氯仿和甲醇的混合溶劑(比例為2:1)。
    • 新增一定量的0.9%鹽水。
    • 離心後,同樣收集下層的氯仿相

    4.清洗

    可以透過加入一定比例的鹽水,再次離心來清洗,去除上層水相中的非脂質雜質


    5.脂質濃縮

    使用旋轉蒸發器或氮吹儀在低溫下蒸發掉溶劑,留下純淨的脂質。


    6.溶劑蒸發

    在氮氣下或真空乾燥機中蒸發溶劑,留下純脂質。


    7.脂質重懸

    將提取得到的脂質重懸在適當的溶劑中(如氯仿),以備後續分析。


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