SUMO內源性的Coip應該怎麼做呢
SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）內源性的Co-Immunoprecipitation（Co-IP）實驗通常遵循以下步驟：
1.細胞裂解：
首先需要收集細胞。對於SUMO化研究，通常使用瞬時轉染的細胞，或者特定條件下處理的細胞，以增加SUMO化蛋白的水平。
2.製備裂解液：
使用包含蛋白酶抑制劑和SUMOylation抑制劑（如N-乙基馬來醯亞胺，NEM）的裂解液。NEM用於抑制去SUMO化酶，保護SUMO化修飾。
3.裂解細胞：
將收集的細胞在裂解液中裂解。這一步驟通常在低溫下進行，以防止蛋白質降解和去SUMO化。
4.離心：
將裂解的細胞上清透過離心分離，以去除細胞碎片。
5.預清理：
對上清液進行預清理，去除非特異性結合的蛋白，通常使用A/G珠或對應的對照抗體。
6.新增抗體：
向預清理後的上清液中加入針對目標蛋白的特異性抗體，使之與SUMO化蛋白結合。有時也可直接使用針對SUMO的抗體進行免疫沉澱。
7.孵育：
將混合物在低溫下過夜孵育，以促進抗體與目標蛋白的結合。
8.捕獲免疫複合物：
新增蛋白A/G珠，以捕獲抗體-蛋白複合物。
9.洗滌：
透過多次洗滌去除非特異性結合的蛋白。
10.洗脫：
使用SDS-PAGE載入緩衝液洗脫免疫複合物。
11.蛋白質電泳：
將洗脫的樣品在SDS-PAGE上進行電泳。
12.蛋白質印跡（Western Blot）：
將電泳後的蛋白轉移到膜上，並使用特異性抗體檢測目標蛋白或其SUMO化形式。
在進行SUMO內源性Co-IP實驗時，重要的是要確保使用合適的緩衝液和條件，以保護SUMO化狀態，並減少蛋白質的降解和去SUMO化。此外，實驗的最佳化和對照實驗也是非常關鍵的步驟。
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