請問準備做蛋白質譜,怎麼準備組織蛋白啊?
準備組織蛋白用於蛋白質譜分析需要遵循幾個關鍵步驟,以確保樣品的質量和適用性:
1.組織採集和儲存:
首先,需要在低溫條件下迅速採集組織樣本,以防止蛋白降解。採集後的組織樣本通常在液氮中冷凍儲存,或者存放在-80°C的冰箱中。
2.組織均質化:
組織樣本需要透過物理方法(如均質機)進行破碎,使細胞破裂釋放蛋白質。在此過程中,通常會新增含有蛋白酶抑制劑的緩衝液,以防止蛋白質在提取過程中被降解。
3.蛋白提取和純化:
使用適當的提取緩衝液,如RIPA緩衝液,以提取組織中的蛋白質。之後,可透過離心等方式去除不溶物,得到清澈的蛋白質溶液。
4.蛋白質濃度測定:
使用Bradford、BCA或其他蛋白定量方法確定蛋白質濃度,確保樣品中蛋白質含量適宜後續分析。
5.蛋白質消化:
常用胰蛋白酶進行消化,將蛋白質分解成較小的肽段,便於質譜分析。
6.樣品準備:
根據質譜儀器的要求,對消化後的肽段進行適當處理,如去鹽、濃縮等。
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