提取蛋白以後,測蛋白濃度,酶解,液質匹配肽段,根據訊號強弱確定含量嗎?提取蛋白怎麼知道提取完不完全呢
透過分析LC-MS所得的訊號強度,確實可以定量分析特定肽段的含量,進而推算其源蛋白的含量。肽段的訊號強度(如峰面積或峰高)與其在樣品中的丰度有關,這是定量分析的關鍵。透過比較目標肽段的訊號強度與已知濃度的標準品的訊號強度,可以估計樣品中該肽段的含量。然後彙總同一蛋白質的不同肽段的定量資料,可以推算出該蛋白在樣品中的總含量。
至於如何判斷蛋白是否提取完全,你可以採用以下方法:
1.蛋白質濃度的測定:
在提取前後分別測定蛋白質的濃度。如果提取後的蛋白濃度顯著低於預期,可能意味著提取不完全。
2.重複性實驗:
對同一樣品進行多次提取。檢查不同重複實驗之間的蛋白質濃度一致性。
3.凝膠電泳:
透過SDS-PAGE等電泳方法分析蛋白質,比較提取前後樣品的電泳圖譜,檢視特定蛋白帶是否消失或減弱。
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