脂質代謝組學研究如何提取脂質

脂質代謝組學是研究細胞內所有脂質分子種類及其變化的科學。這一領域集中於脂質的生物合成、代謝以及它們在生理和病理過程中的作用。提取脂質是研究中一個關鍵步驟，以下是提取脂質的詳細步驟：




1.樣本準備：

收集你的生物樣本，如血液、尿液、細胞或組織。確保樣本在收集和處理過程中避免降解，可能需要在低溫下或使用特定的穩定劑。




2.物理破碎：

如果你的樣本是固體（如組織），需要使用勻漿機、研磨或超聲波處理等方法物理破碎樣本，以增加脂質的可提取性。




3.新增內標：

爲了定量分析和校正提取效率或儀器分析中的丟失，新增已知濃度的內標物（通常是穩定性同位素標記的脂質）到樣本中。




4.脂質提取：

最常用的方法是基於Folch、Bligh和Dyer或Methanol-chloroform的提取：

• 將氯仿-甲醇（比例通常為2:1）加到樣本中，進行混合以提取脂質。這種方法可以有效地從樣本中提取大範圍類別的脂質。
• 根據需要可能會加水進行相分離，一般比例是 1:1:0.9（氯仿：甲醇：水）。混合後，脂質會主要集中在氯仿層（下層）。




5.離心分層：

在新增了水之後，透過離心使得有機相（下層，富含脂質）和水相（上層，富含蛋白和其它極性化合物）分離。




6.收集有機相：

謹慎地移除含有脂質的有機相（氯仿層）而不擾動水層。有機相中包含了待分析的脂質。




7.溶劑蒸發：

使用氮氣吹掃或真空旋轉蒸發器去除有機溶劑，留下純淨的脂質。




8.脂質復溶：

在適當的溶劑中（如甲醇或氯仿/甲醇混合物）重新溶解乾燥的脂質提取物，以備於後續的脂質分析步驟，如液相色譜-質譜聯用（LC-MS）。




這些步驟可以根據具體的研究需求進行調整和最佳化，以確保脂質的高質量提取。脂質提取是脂質代謝組學研究的重要一步，可以為後續的質譜分析、色譜分析或其他分析方法提供高質量的樣品。




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