您好，想問下怎麼用質譜方法檢測純蛋白某個位點磷酸化水平的變化呢
- 肽段檢測：將富集的磷酸化肽段進行質譜分析，獲取其質量到電荷比（m/z）的資料。
- 碎片分析：對磷酸化肽段進行碎片分析（如CID或HCD）來獲取序列資訊。
- 資料庫搜尋：將獲取的資料與資料庫中的蛋白質序列進行比對，以確定磷酸化位點和蛋白質身份。
- 標籤法定量：如使用iTRAQ、TMT等標籤方法，在蛋白質提取階段引入標籤，透過比較不同條件下標籤強度實現定量。
- 非標記定量：如使用SWATH-MS或標準曲線法，透過比較同一肽段在不同樣本中的丰度來進行定量。
質譜（Mass Spectrometry, MS）是研究蛋白質磷酸化的強大工具，以下是常見的用質譜檢測蛋白質某個位點磷酸化水平變化的基本流程：
1.樣品準備：
首先需要提取感興趣的蛋白質樣品。蛋白樣品應該進行足夠的清潔以去除可能的干擾物。
2.酶切：
將蛋白樣品用特定的酶（如胰蛋白酶）進行酶切，得到蛋白肽段。
3.磷酸化肽段富集：
由於磷酸化的肽段在整體蛋白樣品中的比例較低，所以通常需要使用如TiO2或IMAC (鐵離子親和色譜)等方法對磷酸化肽段進行富集。
4.液相色譜-串聯質譜分析：
5.定量分析：
6.驗證：
可以使用如Western blot結合特異性的磷酸化位點抗體等方法，對質譜結果進行驗證。
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