多糖過完纖維柱後不純，過葡聚糖凝膠柱該怎麼過

多糖的純化通常是一個複雜的過程，涉及多步操作。如果你在使用纖維柱後發現多糖樣品不純，可以考慮使用葡聚糖凝膠柱進行進一步的純化。下面是使用葡聚糖凝膠柱進行純化的基本步驟：




1.選擇合適的葡聚糖凝膠：

根據你要分離的多糖的大小選擇合適的葡聚糖凝膠。例如，Sepharose CL-2B、Sepharose CL-4B和Sepharose CL-6B等。




2.準備葡聚糖凝膠柱：

• 將葡聚糖凝膠與適當的緩衝溶液混合，充分懸浮。
• 輕輕地裝載到柱中，避免產生氣泡。
• 讓凝膠自然沉降，並加入緩衝溶液至柱的頂部。




3.平衡柱體：

• 使用與樣品相同的緩衝液透過柱體，以達到平衡。
• 通常需要2-3個柱體容積的緩衝液才能充分平衡。




4.樣品準備：

確保你的樣品已經透過適當的前處理步驟（例如，去鹽、濃縮等）。




5.載入樣品：

將樣品載入到葡聚糖凝膠柱上（注意不要破壞柱頂的凝膠層）。




6.洗脫：

使用適當的洗脫緩衝液，收集不同的體積分段。根據需要，可以增加梯度洗脫，例如透過逐漸增加緩衝液中的鹽濃度。




7.監測和收集亞組：

通常使用紫外檢測器來監測洗脫的多糖，並在適當的時間收集洗脫的亞組。




8.分析和驗證：

使用適當的分析方法（例如，質譜、HPLC或電泳）來驗證你的多糖是否已經被純化。




在操作過程中，需要注意以下事項：




1.洗脫緩衝液的選擇：

確保你的洗脫緩衝液與你的樣品和葡聚糖凝膠相容。




2.樣品體積：

不要超過柱子的載入容量。




3.洗脫速度：

保持一個穩定的洗脫速度，避免對柱子造成壓力。




4.溫度控制：

確保整個過程在適當的溫度下進行，以防多糖降解。




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