想問問多糖過deae-52柱的一些注意事項,一個梯度出現兩個峰正常嗎
- 樣品中存在兩種或多種多糖,它們具有不同的電荷密度,因此在不同的鹽濃度下洗脫。
- 樣品中除了多糖之外還有其他組分(如蛋白質或其他有機分子)也被分離出來。
- 柱上的非特異結合,可能導致柱中的一些組分在不應該的位置被洗脫出來。
一、注意事項:
1.柱的平衡與再生:
確保柱在使用之前已經經過了適當的平衡。使用與即將載入的樣品的pH相同的緩衝液進行柱的平衡,直到出流液的pH和進流液相同。
2.樣品的pH和濃度:
樣品的pH應與平衡緩衝液相匹配。過高或過低的樣品濃度可能導致峰的畸變或結合過強。
3.梯度的設定:
根據預期的多糖種類和帶電性,選擇適當的梯度和鹽濃度。
4.流速:
確保使用推薦的流速。流速過高可能會導致柱的解析度降低。
5.柱的清潔:
定期對柱進行再生和清潔,以防止壓力上升和解析度降低。
6.樣品的前處理:
樣品中的懸浮物和大的顆粒可以堵塞柱,所以最好對樣品進行適當的過濾或離心。
7.緩衝液:
確保緩衝液中沒有影響色譜分離的雜質,並確保用於洗脫的鹽濃度是合適的。
至於一個梯度出現兩個峰是否正常,這取決於你的樣品。一個梯度中出現兩個峰可能意味著:
如果你確實觀察到了兩個峰,並且這與你的預期不符,建議進一步對這兩個峰中的物質進行鑑定,以確定它們的性質和來源。
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