做脊髓組織質譜怎麼準備組織蛋白?先提蛋白再直接送樣嗎?
脊髓組織質譜的蛋白準備流程:
1.組織均質化:
使用冷凍粉碎機或手持組織均質器在冷凍條件下均質化組織。將脊髓組織均質化。一般可以選擇含有適當的蛋白酶抑制劑的RIPA緩衝液或其它蛋白提取液來做均質化。
2.蛋白提取:
將均質化的組織樣本進行離心,收集上清液。上清液中即為提取的蛋白。
3.蛋白量測定:
使用Bradford、BCA或其他適用的方法來測量蛋白的濃度。
4.蛋白純化 (可選):
如果樣品中有汙染物或雜質,可以使用蛋白凝膠電泳等方法對其進行純化。
5.酶切(可選):
使用特定的蛋白酶(如胰蛋白酶)對蛋白進行消化,生成小的多肽片段。
6.樣品清潔(可選):
使用C18柱或其他方法來清除可能對質譜產生干擾的物質。
7.重懸(可選):
將清潔後的樣品在適當的溶液中重懸,為後續質譜分析做好準備。
8.提交樣品:
準備好的蛋白樣品可以送到質譜實驗室進行分析。
至於是否需要自己提蛋白然後送樣給技術服務公司,這取決於技術服務公司提供的服務範圍和詳細要求。有的公司提供從樣品準備到質譜分析的全套服務,而有的公司可能只做質譜分析,因此需要您提供已經準備好的蛋白樣品。最好是在專案開始前詳細諮詢他們的服務範圍和樣品要求,這樣可以確保您提供的樣品滿足他們的要求,從而獲得最佳的分析結果。
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