可以分享一下蛋白鑑定的資料結果及分析方法嗎?如果鑑定出幾十種蛋白,該以哪個值為參考得出最優結果呢?
蛋白鑑定通常是透過質譜法,尤其是液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)來進行的。蛋白質質譜鑑定主要得到的資料有:
1.肽段質量譜:
對蛋白酶消化後的蛋白片段(肽段)進行質譜分析,得到肽段的m/z(質荷比)。
2.碎片質譜:
對選定的肽段進行進一步的碎片化,得到的子片段的m/z。
3.蛋白ID及覆蓋率:
鑑定出的蛋白質的名稱和它的肽段在總蛋白中的覆蓋率。
4.置信度分數:
描述蛋白鑑定結果準確性的數值。
通常需要進一步分析原始資料以得到直觀的結果,常用資料分析方法如下:
1.資料庫匹配:
使用軟體(如Mascot、SEQUEST等)將實驗獲得的肽段質量譜和碎片質譜與已知的蛋白資料庫進行比對,鑑定出可能的蛋白。
2.假陽性率估計:
使用諸如“目標-解碼”(target-decoy)策略評估鑑定的假陽性率。
3.定量分析:
對不同樣本中蛋白的相對或絕對含量進行分析,如透過標記方法(如iTRAQ、TMT)或非標記方法(如LFQ)。
如果鑑定出幾十種蛋白,你可以參考以下引數選擇最優的結果:
1.置信度分數:
通常是蛋白鑑定的首要考量,高分通常意味著更可靠的鑑定。
2.假陽性率:
應控制在一個可接受的範圍內,如1%。
3.蛋白覆蓋率:
高的覆蓋率意味著蛋白鑑定的準確性更高。
4.多次重複實驗的一致性:
多次鑑定結果的重複性可以增加鑑定的可靠性。
即高分、假陽性率低、覆蓋率高及重複性好的資料是相對來說較優的選擇。
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