LC-MS定量原理是什麼?
LC-MS(液相色譜-質譜聯用)是一種將液相色譜(LC)與質譜(MS)結合的分析技術。LC-MS定量的原理包括液相色譜對樣品進行分離,質譜對分離後的組分進行檢測和定量。以下是LC-MS定量原理的主要步驟:
1、液相色譜分離:
在LC-MS系統中,首先利用液相色譜對樣品中的組分進行分離。液相色譜透過不同的固定相和移動相以及梯度洗脫程式來實現組分的分離。分離的效果取決於色譜柱、流動相、洗脫條件等因素。
2、電噴霧電離:
經過液相色譜分離後,樣品溶液被輸送到質譜儀的電離源。在生物分析中,最常用的電離方式是電噴霧電離(ESI)。電噴霧電離將樣品溶液轉化為帶電的氣溶膠,然後將氣溶膠中的樣品分子或離子引入質譜儀。
3、質譜檢測:
進入質譜儀後,樣品離子經過質量分析器(例如四級杆、飛行時間、軌道阱等),按照質荷比(m/z)進行分離。質譜檢測器檢測到的離子訊號強度與樣品濃度成正比。透過測量目標離子的訊號強度,可以實現對樣品中的組分進行定量分析。
4、定量策略:
C-MS定量通常採用外標法、內標法或多點校正法。在外標法中,透過測量已知濃度的標準品,並繪製標準曲線,然後根據待測樣品的訊號強度來計算濃度。內標法透過新增已知濃度的同位素標記內標物質,可以校正樣品製備和分析過程中的誤差,提高定量的準確性和精確性。多點校正法則透過在不同濃度水平下建立多點校正曲線,使得定量結果更為可靠。
總之,LC-MS定量原理包括液相色譜分離、電離、質譜檢測以及定量策略。透過對目標組分的訊號強度進行測量和計算,可以實現準確、精確的定量分析。
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