麻煩問一下有沒有DSS蛋白質交聯的具體步驟

“DSS” （二磺基三氮唑基丙酸二酯，Disuccinimidyl suberate)是一種常見的化學交聯劑，主要用於研究和穩定蛋白質之間的相互作用。DSS在室溫下以NHS酯的形式活化，可以與蛋白質的氨基酸氨基反應生成共價鍵。使用DSS進行蛋白質交聯的具體步驟可能會根據您的特定需求和實驗條件而變化，我們可以提供一個大致的基本步驟，希望可以幫助到您：

1.蛋白質準備：

首先，您需要準備含有目標蛋白質的樣品。如果蛋白質在細胞內，可能需要透過細胞破碎和離心等步驟提取蛋白質。然後，透過減蛋白劑（如DTT）還原蛋白質的二硫鍵，以使蛋白質在原始狀態下進行交聯。

2.DSS準備：

將DSS溶解在適當的溶劑中（通常為DMSO），然後在交聯反應開始前立即稀釋到所需的最終濃度。通常，DSS的濃度會比蛋白質濃度高出幾倍。

3.交聯反應：

將溶解的DSS新增到蛋白質樣品中，輕輕搖動混合，並在適宜的溫度（通常為室溫）下孵化一定時間（通常為幾分鐘到幾小時），使DSS與蛋白質氨基酸氨基反應生成共價鍵。

4.終止反應：

新增適量的Tris或其他氨基酸來終止反應，防止DSS與非目標部位的氨基反應。

5.清洗和分析：

透過離心等方法去除未反應的DSS和其他雜質，然後使用質譜、電泳或其他技術分析交聯的蛋白質。

6.分析：

使用適當的方法（例如質譜、免疫印跡、蛋白質印跡或其他技術）分析交聯產物。