你好,我正在做蛋白交聯,想知道使用了交聯劑之後樣品如何處理呢?直接加入裂解液裂解嗎?
在交聯法蛋白相互作用分析實驗中,使用了交聯劑(如甲醛)對細胞進行處理後,通常需要先停止交聯反應,比如透過新增Tris緩衝液、甘氨酸或者透過快速將細胞冷卻至4°C來實現。細胞交聯後,可以進行冷凍儲存,或者立即進行裂解。
以加入甘氨酸為例:
1.交聯後加入甘氨酸(glycine),甘氨酸可以和甲醛反應,從而終止甲醛的交聯作用。
2.將細胞沖洗幾次以去除未反應的甘氨酸和甲醛。
3.將細胞收集起來並加入裂解液以進行下一步的實驗。根據你的實驗目標,你可能需要選擇適合的裂解液,如RIPA裂解液或NP-40裂解液。
4.然後透過機械或超聲的方式使細胞裂解。
5.最後,透過離心等方法,去除細胞殘渣,收集含有蛋白的上清液。
以上步驟只是通常的實驗流程,具體的實驗步驟可能會因為你的實驗設計和目標而有所不同。如果你在實驗過程中遇到任何問題,我建議你尋求實驗室的同學、導師或諮詢相關領域的專業人士。
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