請問蛋白交聯下一步是直接裂解細胞嗎?用什麼裂解液比較好呢
蛋白交聯(protein crosslinking)是在細胞生物學和分子生物學中常用的實驗手段,其主要目標是穩定細胞內的蛋白質-蛋白質相互作用。一般來說,交聯之後的下一步確實是裂解細胞(cell lysis)。裂解的目的是開啟細胞,釋放其中的蛋白質等生物大分子。
使用哪種裂解液取決於你想要提取的是哪種型別的細胞,以及你的下一步實驗是什麼。以下是一些常用的裂解液型別及適用的場景:
1.RIPA裂解液:
RIPA裂解液可以有效裂解大多數型別的細胞和組織,提取總蛋白。它含有非離子表面活性劑NP-40和鳥苷酸鈉(Sodium Deoxycholate)以及陰離子表面活性劑SDS,因此可以提取膜蛋白和細胞內蛋白。
2.NP-40裂解液:
NP-40裂解液可以提取細胞內蛋白,但對膜蛋白的提取效果不如RIPA裂解液。一般用於免疫沉澱等實驗。
3.SDS裂解液:
SDS裂解液對蛋白的裂解效果極好,能裂解所有型別的蛋白,但會破壞蛋白之間的相互作用,所以一般用於需要完全裂解蛋白的實驗,如Western blot。
4.高鹽裂解液:
高鹽裂解液能夠提取某些具有特殊需求的蛋白,如染色質蛋白。
5.三氯乙酸(TCA)沉澱:
當你需要移除蛋白中的磷酸化修飾,或者富集低丰度的蛋白質時,可以使用TCA沉澱法。
需要注意的是,裂解液通常也應含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑,以防止蛋白質在裂解過程中被降解或失去磷酸化修飾。此外,裂解液的pH值,鹽度,還有是否含有還原劑(如DTT,β-mercaptoethanol)等因素都可能影響到蛋白質的穩定性和相互作用。
在選擇裂解液時,要考慮你的實驗目標,以及你所需要裂解的細胞型別。此外,應注意的是,裂解液往往需要在使用前新增酶抑制劑和磷酸酶抑制劑以防止蛋白質降解和去磷酸化。
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