想要非靶向差異代謝產物分析的資料
非靶向差異代謝產物分析(Untargeted Differential Metabolomics Analysis)是一種新興的代謝組學研究方法。在這種分析中,不專注於特定的代謝物或代謝途徑,而是透過全面、無偏見地對所有可檢測的代謝物進行定性和定量分析,以發現樣本間代謝物濃度的差異。以下是關於非靶向代謝組學分析的主要步驟和關鍵技術:
1.樣品準備:
非靶向代謝物分析的第一步是樣品的收集和處理。樣品可以是生物組織、細胞、生物體液等。樣品需要經過精細的處理,例如冷凍破碎、酶解、蛋白沉澱、提取等步驟,以最大化提取代謝物。
2.代謝物檢測:
提取的樣品會透過氣質聯用(GC-MS)或液質聯用(LC-MS)進行檢測。這兩種技術都能提供關於代謝物的質量和結構資訊。GC-MS常用於水溶性代謝物(需要衍生化)、部分脂類和有機酸的靶向分析。LC-MS常用於氨基酸、糖類、醇類、有機酸、胺類、TCA迴圈中間體等水溶性小分子以及脂質大分子的靶向和非靶向分析。
3.數據處理:
檢測後,生成的大量資料需要透過軟體進行處理,包括峰值識別、歸一化、對齊等步驟。此外,代謝物的鑑定也是一個關鍵步驟,一般會透過對比資料庫中的質譜資料進行。
4.資料分析:
處理後的資料可以進行統計學和生物資訊學分析。主要的分析方法包括主成分分析(PCA)、偏最小二乘判別分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)、基於t分佈的隨機近鄰嵌入(t-SNE)等,這些方法能夠找出樣品間的差異性,並確定貢獻這些差異性的關鍵代謝物。
5.結果驗證和解釋:
最後,透過實驗驗證分析結果,並結合已知的生物學知識解釋結果,理解代謝物差異背後的生物學意義。
非靶向差異代謝產物分析能夠提供更全面的代謝物資訊,因此在疾病診斷、生物標誌物發現、藥物開發等領域具有廣泛的應用。
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