圓二色譜用什麼儀器啊,該怎樣使用呢?
"圓二色譜"(Circular Dichroism,CD)是一種分析蛋白質和核酸等生物大分子二級結構的技術。它是利用生物大分子中的光學活性基團對左旋和右旋圓偏振光的吸收差異進行測量,由此獲得樣品的結構資訊。CD光譜在200-250nm範圍(也被稱為遠紫外CD光譜)常常用於測定蛋白質的二級結構,包括α螺旋、β摺疊和無規捲曲結構等。
CD光譜的測定需要使用專門的儀器——圓二色光譜儀。使用的具體步驟如下:
1.樣品製備:
首先需要準備待測樣品。對於蛋白質,你需要製備出清晰、沒有顆粒的溶液,濃度通常在0.1-1mg/mL之間,且需要確保溶液中沒有會影響CD訊號的雜質,如洗滌劑、鹽類等。
2.設定引數:
在儀器上設定適當的引數,例如掃描的波長範圍(對於蛋白質,通常是190-250nm)、波長間隔、每個波長的測量時間等。
3.基線校正:
使用樣品中的溶劑進行基線校正,即測量並記錄沒有樣品的溶液的光譜。
4.樣品測量:
在基線校正後,將樣品放入儀器中進行測量。
5.數據處理:
在測量結束後,需要對資料進行處理。包括基線校正,平滑處理,以及將光譜資料轉換為蛋白質的二級結構含量等。
請注意,以上步驟可能需要根據具體的樣品和儀器進行調整。
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