請問用瓊脂糖膠測多糖分子量的方法步驟有嗎?謝謝
瓊脂糖凝膠電泳 (Agarose Gel Electrophoresis, AGE) 是一種常見的用於測量和分離多糖、DNA和RNA等大分子的方法。以下是使用瓊脂糖膠進行多糖分子量測定的基本步驟:
1.準備瓊脂糖凝膠:
瓊脂糖膠的製備通常涉及將特定百分比的瓊脂糖(通常在0.5%至2%之間,取決於目標分子的大小)加入到適當的緩衝液中(如TAE或TBE),然後加熱至沸騰直到瓊脂糖完全溶解。再將瓊脂糖溶液倒入凝膠模具中,模具上方放置好樣品槽的梳子。等待凝膠冷卻和凝固。
2.加樣:
在瓊脂糖膠凝固後,小心的取出樣品槽梳子,並將凝膠轉移到電泳槽中,加入電泳緩衝液,然後將多糖樣品加入到樣品槽中。同時,也要加入已知分子量的標準品,這將用於之後的分子量計算。
3.進行電泳:
加好樣品後,最好等樣品聚集到樣品孔的底部後,接上電源。根據分子大小和瓊脂糖濃度,設定合適的電壓,並開始電泳。通常,大分子在凝膠中遷移的速度慢於小分子。
4.染色和顯影:
電泳結束後,用適當的染料(如碘化鉀-碘溶液)對凝膠進行染色,然後進行顯影,使多糖條帶視覺化。
5.分析結果:
透過對比樣品和已知分子量的標準品的遷移距離,可以計算出你的多糖樣品的分子量。一般來說,遷移距離和分子量呈對數關係,可以透過製作標準品的標準曲線來計算樣品的分子量。
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