您好想要二維凝膠電泳的流程圖
我們可以提供二維凝膠電泳的主要流程供您參考:
1.樣品準備:
首先收集和準備需要進行電泳的蛋白質樣品。
2.第一維:等電聚焦(IEF):
在第一維電泳中,利用蛋白質在一定pH範圍內的等電點(pI,即蛋白質不帶電的pH值),使蛋白質在電場中沿pH梯度運動,從而實現分離。將樣品載入到一根填充有等電聚焦膠的管子(IPG條)中,然後在電場下進行執行。樣品中的蛋白質會就在它們的等電點處聚集。
3.第二維:SDS-PAGE:
第二維電泳是一種標準的聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE),其使用SDS(十二烷基硫酸鈉)來使蛋白質帶有負電荷。在此步驟中,IPG條被放在SDS-PAGE凝膠上,然後在電場的作用下,不同大小的蛋白質會在凝膠中以不同的速度遷移從而實現二維分離。
4.染色和成像:
電泳完成後使用染料(如考馬斯亮藍或銀染)對凝膠進行染色。然後使用適當的成像裝置對染色的凝膠進行成像,這樣就可以觀察到一個由不同蛋白質斑點組成的凝膠影象。
5.影象分析:
最後,透過與已知的標準或者對照進行比較,分析成像結果以確定各個蛋白質斑點的等電點和分子量。也可以進一步對特定的蛋白質斑點進行切割、提取和質譜分析,以確定其蛋白質身份。
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