請問細胞體內交聯和先裂解再交聯有什麼區別呢？
交聯(cross-linking)法透過化學反應將兩個或兩個以上的分子連結在一起，這種技術常常被用於固定細胞內的分子在某一時刻的相對位置，幫助研究者更好地理解細胞內的生物過程，也是蛋白質相互作用研究中的重要技術。交聯試劑可以在蛋白質相互作用時將它們共價交聯在一起，捕獲蛋白質-蛋白質複合物，凍結短暫微弱的相互作用，從而實現對短暫相互作用蛋白的分離和表徵。
一般來說，交聯過程在體內或體外都可以進行，使用體內還是體外交聯取決於專案的需求。兩者區別在於，蛋白質在體內交聯過程中以天然狀態交聯，而對於體外交聯，蛋白質可能會發生變性。
1.細胞體內交聯：
體內交聯反應的過程中，蛋白質交聯反應發生在細胞內部，因此可以消除假陽性的相互作用及蛋白質複合物穩定性喪失的風險。位於細胞膜內的蛋白質通常使用疏水性和脂溶性交聯劑進行交聯反應，而位於細胞膜上的蛋白質（如血漿錨定的受體）通常使用親水性和水溶性交聯劑進行交聯反應。儘管蛋白質保持天然狀態，但由於細胞中蛋白質的複雜性，體內交聯的最佳化過程也可能很複雜，仍然存在發生非特異性交聯反應的可能性，可以透過使用間隔臂較短的交聯劑來消除非特異性交聯的問題。
2.先裂解再交聯：
在體外交聯過程中，細胞被均質化，裂解。因此，該方法更適合分析較穩定的蛋白質-蛋白質相互作用。由於在特定的裂解緩衝液中對細胞進行裂解，想要對反應條件進行控制變得比較容易，如溫度、pH、離子強度等反應條件都可以進行調整。因為不在受到體內環境的限制，也有更多型別的交聯劑可供選擇，也可以更好的控制非特異性交聯。
總的來說，選擇哪種方法取決於你的研究目標。如果你希望捕獲活細胞中的蛋白質互作，那麼建議你選擇體內交聯。而如果你更關心在裂解液中的蛋白質互作，那麼你可以選擇先裂解再交聯。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
GST融合蛋白Pull-down技術結合質譜聯用的蛋白互作分析
How to order?
