做蛋白質測序時,切下來的SDS蛋白條帶含有不止一條蛋白條帶怎麼辦?
當切下來的SDS蛋白條帶含有不止一條蛋白條帶時,這些條帶可能代表著多個蛋白質或不同的蛋白質異構體(例如不同的翻譯產物或翻譯後修飾形式)。在這種情況下,需要進一步分離和純化這些蛋白質,以便單獨鑑定每個蛋白質的氨基酸序列。
通常,可以使用以下方法來處理含有多個蛋白條帶的SDS膠:
1.SDS-PAGE分離:
首先,將含有多個蛋白條帶的SDS膠進行再次電泳分離。透過調整電泳條件,可以嘗試將不同的蛋白質條帶進一步分離開來。
2.切割純化:
分離後的條帶可以再次被切割下來,將每個單獨的蛋白條帶進行純化。這可以透過一系列方法實現,如電泳遷移片段的切割、膠片切割或者其他蛋白質純化技術。
3.質譜測序:
純化的每個蛋白條帶可以進行質譜測序,如MALDI-TOF MS(基質輔助鐳射解吸離子飛行時間質譜法)或者LC-MS/MS(液相色譜串聯質譜法)。透過質譜測序,可以得到每個蛋白質的氨基酸序列資訊。
4.資料庫比對:
最後,將獲得的質譜資料與蛋白質資料庫進行比對,以找到與實驗資料匹配的蛋白質資訊。
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