質譜是如何完成肽段序列鑑定的?
質譜完成肽段序列鑑定的原理及過程
1.樣品準備與前處理:
蛋白樣品首先經過降解,如酶切,得到一系列肽段。
這些肽段經過清潔和富集,為後續的質譜分析做好準備。
2.離子化過程:
肽段在質譜儀中首先被離子化,常用的離子化技術有電噴霧離子化(ESI)和鐳射解吸/電離(MALDI)。
3.肽段的質量測定:
離子化後的肽段進入質量分析器,例如飛行時間質譜儀(TOF)或離子阱質譜儀,測定其準確的質量或者質量/電荷比。
4.碎片化:
肽段離子在第一次質量測定後,可以在碰撞細胞中與碰撞氣體如氮氣或稀有氣體碰撞產生碎片離子。這一過程稱為碰撞誘導解離(CID)。
5.碎片的質量測定:
碎片離子的質量/電荷比被測定,這些碎片資訊用於推測原始肽段的氨基酸序列。
6.資料分析和肽段序列鑑定:
利用質譜資料分析軟體,如Mascot、SEQUEST等,將實驗得到的肽段和碎片資訊與蛋白質資料庫進行匹配,得到肽段的氨基酸序列。
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