蛋白的肽鏈是如何測序的？

蛋白的肽鏈測序是指確定蛋白質中氨基酸序列的過程。它是透過將蛋白質分解為小片段（肽段），然後對這些肽段進行測序來實現的。目前常用的方法是質譜法和DNA/RNA測序方法。




一、質譜法測序：




1.製備樣品：

將蛋白質進行消化，通常使用酶（如胰蛋白酶）將蛋白質分解為小肽段。




2.質譜分析：

使用質譜儀對肽段進行分析。首先，肽段會被離子化形成帶電離子。然後，帶電離子會根據其質荷比（m/z）進行分離和檢測。




3.資料解析：

透過質譜儀獲得的資料，可以確定每個肽段的質量，從而推測出蛋白質的氨基酸序列。




二、DNA/RNA測序法測序：




1.轉錄與逆轉錄：

將蛋白質編碼基因轉錄為RNA，然後透過逆轉錄反應將RNA轉化為互補的DNA（cDNA）。




2.PCR擴增：

使用聚合酶鏈反應（PCR）對cDNA進行擴增，產生許多複製品。




3.測序：

使用DNA測序技術對PCR擴增產物進行測序，從而確定原始蛋白質編碼基因的序列。




4..翻譯：

將DNA序列翻譯成相應的蛋白質氨基酸序列。




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