泛素化蛋白一般怎麼檢測？
泛素化是一種翻譯後修飾過程，透過將泛素（Ubiquitin）結合到蛋白質上，調控蛋白質的降解、訊號傳導和其他功能。目前常用的檢測泛素化蛋白的方法主要有：
1.免疫印跡（Western Blot）：
首先對細胞或組織樣本進行蛋白質提取，然後透過SDS-PAGE進行蛋白質分離。將分離的蛋白質轉移到膜上，然後用抗泛素抗體孵育。如果蛋白質泛素化，將觀察到分子量較高的泛素化蛋白帶。此外，如果要檢測特定蛋白質的泛素化情況，還可以使用該蛋白質的特異性抗體進行印跡。
2.免疫沉澱（Immunoprecipitation，IP）：
先將抗泛素抗體或特定蛋白的抗體與蛋白A/G磁珠結合，然後將細胞或組織蛋白提取物加入到磁珠中，孵育一段時間。透過磁分離，可以將泛素化蛋白或特定蛋白的泛素化形式沉澱下來。最後，透過SDS-PAGE和Western Blot分析沉澱物，以檢測泛素化蛋白。
3.質譜分析（Mass Spectrometry，MS）：
質譜分析是一種靈敏且高通量的方法，可以用於檢測泛素化蛋白。首先對細胞或組織樣本進行蛋白質提取，然後進行酶解。透過液相色譜與質譜聯用（LC-MS/MS）進行蛋白質的鑑定和定量。質譜資料分析可以識別泛素化位點以及泛素化水平。
4.泛素化酶活性檢測：
可以透過檢測泛素化酶（如E1、E2和E3酶）的活性來間接檢測泛素化蛋白。泛素化酶活性檢測通常使用基於熒光、發光或光度法的體外酶活性測定試劑盒。
5.酵母雙雜交（Yeast Two-Hybrid）：
酵母雙雜交技術可以用於篩選與泛素化酶或泛素結合蛋白相互作用的蛋白質，從而揭示可能發生泛素化的蛋白質。透過將目標蛋白分別融合到酵母雙雜交系統中的啟用域和DNA結合域，可以篩選出在酵母中發生相互作用的蛋白質對。
6.生物資訊學分析：
透過生物資訊學方法可以預測泛素化位點和潛在的泛素化蛋白質。透過比較多種生物物種中蛋白質序列的保守性，可以識別可能發生泛素化的位點。此外，還可以透過分析蛋白質網路和訊號通路，預測泛素化可能涉及的生物過程。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
How to order?
