有知道蛋白質純化方法嗎？

蛋白質純化的目的是獲得高純度的目標蛋白質，以便進行進一步的研究和應用，如研究其功能機制和三維結構。蛋白質純化的方法有多種，不同的純化方法原理和步驟都不同，詳細解釋如下：




一、離子交換色譜 (Ion-Exchange Chromatography)




1.原理

根據蛋白質表面帶電性與色譜柱上的離子交換劑的相互作用進行分離。




2.實驗步驟

• 準備含有特定離子交換樹脂的色譜柱。
• 平衡色譜柱以確保離子交換劑處於所需的電荷狀態。
• 負載樣品到色譜柱上。
• 用緩衝液洗脫非特異性結合的成分。
• 使用鹽梯度或pH梯度逐步或連續地洗脫柱中的蛋白質。




二、親和色譜 (Affinity Chromatography)




1.原理

利用蛋白質和特定分子（如底物、抗體、金屬離子等）之間的特異性相互作用進行分離。




2.實驗步驟

• 準備含有特定親和配體的色譜柱。
• 平衡色譜柱。
• 負載含有目標蛋白質的樣品。
• 用緩衝液去除非特異性結合的物質。
• 用特定的洗脫緩衝液（通常包含與親和配體競爭性結合的分子）洗脫目標蛋白質。




三、凝膠滲透色譜 (Size-Exclusion Chromatography)




1.原理

基於分子大小進行分離。小分子進入凝膠珠孔內，移動速度減慢；大分子則在凝膠珠之間移動，移動更快。




2.實驗步驟

• 準備含有適當孔徑的凝膠珠的色譜柱。
• 平衡色譜柱。
• 負載樣品。
• 以一定的流速透過緩衝液，並收集流出的樣品。




四、凝膠電泳法 (SDS-PAGE)




1.原理

在電場作用下，依據蛋白質的大小和電荷進行分離。




2.實驗步驟

• 準備含有SDS的凝膠。
• 載入樣品。
• 施加電場。
• 執行電泳。
• 進行染色和成像。




五、沉澱法 (Precipitation)




1.原理

透過改變溶液條件（如pH、離子強度、溶劑）使蛋白質失溶並沉澱。




2.實驗步驟

• 將樣品置於適當的緩衝液中。
• 新增沉澱劑，如硫酸銨、酒精等。
• 輕柔攪拌並靜置，以促使蛋白質沉澱。
• 離心並去除上清液，收集沉澱物。




百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商




相關服務：

SDS-PAGE蛋白質純度分析

蛋白質純度分析（分子篩/反相色譜）

HPLC測定蛋白純度