蛋白純化，為什麼純化的蛋白大小和預計的不符，預測的大小為107kd，跑膠出來卻是60kd？
如果你純化的蛋白質在SDS-PAGE電泳後顯示的分子量遠小於預計值（例如，預計為107 kDa但實際顯示為60 kDa），可能有幾個原因：
1. 蛋白質降解
最常見的解釋是蛋白質在提取和純化過程中部分降解。這通常是由於蛋白酶的活性。確保在蛋白質提取和純化過程中新增適量的蛋白酶抑制劑，並儘量快速操作。
2. 起始密碼子選擇錯誤
在異源表達的情況下，如果構建的表達載體起始密碼子選擇不當，可能導致翻譯從一個不正確的起始密碼子開始，從而生成一個截短的蛋白質。
3. RNA降解或不完整轉錄
如果是由RNA轉錄而來的，那麼RNA的降解或者不完整的轉錄也可能是原因。
4. 翻譯後修飾
某些翻譯後修飾可能會導致蛋白質更容易降解或者在SDS-PAGE下表現異常。
5. 特殊的蛋白質結構
非常少數情況下，蛋白質的二級、三級或四級結構可能會在SDS-PAGE下影響其遷移，但這通常不會引起如此大的分子量差異。
6. 實驗錯誤
比如說樣品製備錯誤，導致測得的蛋白質分子量不準確。
解決辦法：
1.質譜分析：
對蛋白質樣品進行質譜分析，以確定其氨基酸序列，確認是否與預期相符。
2.Western Blot：
使用特異性抗體進行Western blot分析，進一步確認蛋白質的身份。
3.重新設計和驗證表達構建：
確保你的表達載體設計正確，並透過DNA測序進行驗證。
4.最佳化純化條件：
例如，新增蛋白酶抑制劑，降低操作溫度等。
5.RNA質量檢查：
如果是從RNA轉錄得來的，檢查RNA的質量和完整性。
百泰派克生物科技--生物製品表徵，多組學生物質譜檢測優質服務商
相關服務：
提交需求
How to order?
