紅外光譜測蛋白質二級結構檢測原理?
紅外光譜是一種電磁輻射,其波長範圍在4000到400 cm^-1之間。蛋白質中的肽鍵的C=O和N-H 結構會吸收特定波長的紅外光,主要出現在紅外光譜的1700-1600 cm^-1 (醯胺I帶)和1550-1500 cm^-1 (醯胺II帶)區域。肽鍵的特定伸縮振動頻率(也即其在紅外光譜中的吸收位置)會受到其周圍環境的影響。例如,α-螺旋、β-摺疊和無規則捲曲結構等蛋白質的不同二級結構,會使得C=O和N-H振動在略微不同的頻率吸收紅外光。
透過對醯胺I帶區域的吸收峰進行解析和擬合,可以得到各種二級結構在蛋白質中的相對含量。爲了提高解析度和訊雜比,有時可以使用氘代水來代替普通水作為溶劑。在氘代水中,水的強紅外吸收不會與蛋白質的吸收重疊,從而使得蛋白質的紅外訊號更加明確。
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