請問sds-page檢測出的蛋白質分子量大於預期都有哪些可能呢?
當你在 SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis) 檢測中發現蛋白質分子量大於預期時,可能有以下幾種原因:
1. 蛋白質聚合:
在某些情況下,蛋白質可能會形成二聚體或更大的聚合物。這可能是由於蛋白質本身的性質,或者是由於樣品處理過程中的條件(例如,pH,溫度,離子強度等)引起的。如果蛋白質聚合,那麼在 SDS-PAGE 中,它們的遷移速率將比單個蛋白質分子慢,從而導致檢測到的分子量大於預期。
2. 翻譯後修飾:
蛋白質在翻譯後可能會發生各種化學修飾,例如磷酸化,糖基化,泛素化等。這些修飾可能會增加蛋白質的分子量,從而導致 SDS-PAGE 檢測到的分子量大於預期。
3. 蛋白質形狀:
SDS-PAGE 是根據蛋白質的分子量進行分離的,但是蛋白質的形狀也會影響其在凝膠中的遷移。一些非球形的蛋白質可能會在 SDS-PAGE 中遷移得比其實際分子量更慢,從而導致檢測到的分子量大於預期。
4. 樣品製備問題:
如果樣品沒有完全被 SDS 溶解,或者沒有完全被 β-mercaptoethanol 或 DTT (dithiothreitol) 還原,那麼蛋白質可能會以聚合物的形式存在,從而導致 SDS-PAGE 檢測到的分子量大於預期。
5. 凝膠電泳條件:
如果電泳條件(例如,電壓,電泳時間,凝膠濃度等)沒有正確設定,那麼可能會影響蛋白質在凝膠中的遷移,從而導致 SDS-PAGE 檢測到的分子量大於預期。
爲了解決這個問題,你可以嘗試最佳化樣品處理和電泳條件,或者使用其他技術(例如,質譜,西方印跡等)來進一步驗證你的結果。
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