為什麼SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳可以用於提純蛋白質?
SDS-PAGE電泳是一種常用的蛋白質分離和純化技術。它的原理是利用SDS(十二烷基硫酸鈉)和聚丙烯醯胺凝膠的特性,將蛋白質樣品分離成不同大小的帶狀條帶,從而實現蛋白質的純化。
1.SDS的作用:
SDS是一種表面活性劑,它能夠與蛋白質分子中的氫鍵和疏水相互作用,使蛋白質分子展開成線性結構。SDS還能夠給蛋白質分子帶上負電荷,使蛋白質在電場中向陽極移動。這樣,SDS能夠使蛋白質在凝膠電泳中按照其分子量大小進行分離。
2.聚丙烯醯胺凝膠的作用:聚丙烯醯胺是一種高分子化合物,它可以形成一種網狀結構的凝膠。這種凝膠具有一定的孔隙度,可以讓蛋白質分子在電場中透過。聚丙烯醯胺凝膠的孔隙大小可以透過改變凝膠的濃度和交聯程度來調節,從而實現對蛋白質的分離。
3.分離過程:
在SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳中,首先將蛋白質樣品與SDS混合,使蛋白質分子展開成線性結構,並帶上負電荷。然後,將混合物載入到聚丙烯醯胺凝膠中,施加電場使蛋白質向陽極移動。由於不同蛋白質的分子量不同,它們在凝膠中的移動速度也不同。較小分子量的蛋白質會更快地透過凝膠,而較大分子量的蛋白質則會較慢地透過凝膠。最終,蛋白質樣品會在凝膠上形成一系列帶狀條帶,每個條帶代表一個特定分子量的蛋白質。
4.提純過程:
在SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳中,可以透過切割凝膠上的目標蛋白質條帶來進行純化。將目標蛋白質條帶切割下來後,可以進行進一步的處理,如洗脫、濃縮和再溶解等步驟,以得到純化的蛋白質樣品。
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