酪蛋白酶解得到的多肽段,上液質分析前,用C18spe柱脫鹽,回收不到肽段,什麼原因?
1.樣品處理:
在樣品處理過程中,可能存在一些問題。例如,樣品可能沒有完全結合到C18柱,或者在洗脫過程中可能沒有完全洗脫。這可能是由於樣品的pH值、離子強度、有機溶劑比例等條件不適合C18柱的結合和洗脫。
2.C18柱的選擇:
不同的C18柱有不同的特性,包括顆粒大小、孔徑、表面化學性質等。這些特性會影響到肽段的結合和洗脫效率。可能你的C18柱不適合你的樣品。
3.洗脫液的選擇:
洗脫液的選擇也很重要。一般來說,含有一定比例的有機溶劑(如乙腈或甲醇)的洗脫液可以提高肽段的洗脫效率。但是,如果有機溶劑的比例過高,可能會導致肽段的溶解性降低,從而影響到回收率。
4.肽段的性質:
肽段的性質,如大小、電荷、疏水性等,也會影響到其在C18柱上的結合和洗脫效率。可能你的肽段的性質不適合用C18柱進行處理。
5.操作問題:
在實驗操作過程中,可能存在一些問題。例如,洗脫速度過快,可能會導致肽段沒有完全洗脫;或者在洗脫過程中,可能存在一些機械性的損失,如樣品的揮發、濺出等。
爲了提高肽段的回收率,您可以嘗試以下幾個策略:
1.調整洗脫緩衝液的組成,例如增加有機溶劑的濃度。
2.使用新的、活性好的SPE柱。
3.根據您的肽段的特性調整樣品的pH和鹽濃度。
4.嘗試使用其他型別的SPE柱,例如更加極性的SPE柱,以最佳化肽段的結合和洗脫。
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