western blot 的原理是什麼?
Western Blot,也被稱為蛋白質免疫印跡,是一種用於檢測特定蛋白質在樣品中的存在和量的常用實驗方法。Western blot的實驗原理涉及幾個關鍵的生物化學和分子生物學原理:
1.蛋白質的電泳分離:
蛋白質帶有固有的電荷,通常在鹼性pH下是負電荷。在聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中,使用SDS(十二烷基硫酸鈉)使蛋白質帶有均一的負電荷。這樣,蛋白質在電場中的遷移速率主要取決於它們的分子量,而不是它們的原始電荷。
2.蛋白質的轉移:
從凝膠到固相載體(通常是硝酸纖維素或聚偏氟乙烯膜)的過程涉及電荷驅動。在電場的作用下,從凝膠中的蛋白質被轉移到膜上。
3.抗體特異性:
抗體是免疫系統產生的,能夠特異性地識別和結合到特定的抗原(在這種情境下通常是目標蛋白質)上。Western blot利用這種特異性,透過首先使用一級抗體特異性地結合目標蛋白,然後使用與一級抗體結合的二級抗體,該二級抗體往往結合有一個可以檢測的標記。
4.檢測:
二級抗體通常與酶(如過氧化物酶)或熒游標記結合。在適當的檢測條件下(例如加入底物的情況下),這些標記產生可以視覺化的訊號(如光或顏色),其強度與目標蛋白的量成正比
Western blot的原理基於蛋白質的電泳分離、電荷驅動的轉移、抗體的特異性識別,以及酶或其他標記的檢測。這些原理結合起來,使得Western blot成為一種強大、特異性的技術,用於檢測特定蛋白質在複雜的蛋白質混合物中的存在和定量。
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