如何定量分析免疫組化和western blot 的結果,求具體步驟

一、免疫組化定量分析:




1.圖片獲取:

使用顯微鏡拍攝處理後的組織切片，並確保所有圖片的拍攝條件（如曝光時間、光源亮度等）相同。




2.圖片分析:

使用影象分析軟體（如ImageJ）開啟影象。




3.設定閾值:

根據背景和染色的強度設定一個閾值，使染色區域可以被區分。




4.測量:

測量閾值以上的區域的面積和強度，得到每個區域的平均強度值。




5.正常化:

使用對照組資料正常化結果，或與其他標記物進行比較。




二、Western Blot定量分析:




1.獲得影象:

使用膠片或數字成像系統捕獲Blot影象。




2.選擇合適的軟體:

如ImageJ、Quantity One等進行影象分析。




3.背景減去:

選擇一個沒有條帶的區域作為背景，使用軟體減去背景。




4.條帶定量:

使用軟體工具選擇每個條帶，並測量其灰度值。




5.正常化:

通常使用內部標準如β-Actin或GAPDH等來正常化所感興趣的蛋白條帶的強度。




6.資料分析:

使用圖形或統計軟體進行後續資料分析。

 

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