如何用ImagJ進行WB定量分析
使用ImageJ進行Western Blot(WB)定量分析的基本步驟如下:
1.匯入影象:
開啟ImageJ程式,選擇‘File’>‘Open’來匯入你的WB影象。
2.調整影象大小和對比度:
爲了得到最佳的分析結果,你可能需要調整影象的亮度和對比度。選擇‘Image’>‘Adjust’>‘Brightness/Contrast’來進行調整。
3.選擇ROI(Region of Interest):
使用矩形選擇工具在你想要量化的條帶上選擇一個區域。
4.分析:
選擇‘Analyze’>‘Gels’>‘Plot Lanes’。這將為你選擇的每個條帶提供一個峰值圖。從這個峰值圖,你可以量化條帶的強度。
5.定量:
條帶的強度可以與一個已知濃度的標準樣品進行比較,以定量你的樣品中的目標蛋白的含量。
對於細胞表面的兩種膜蛋白的分子數的檢測,Western Blot通常用於蛋白的相對或絕對定量,但不直接用於確定細胞表面的分子數。要精確地測量細胞表面的蛋白分子數,通常需要使用像流式細胞儀這樣的技術,並使用熒游標記的抗體來標定目標蛋白。結合適當的標準品,流式細胞儀可以估計細胞表面的分子數。
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